Питательные среды. Классификация питательных сред Питательная среда Агар щелочной описание
Представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный и светочувствительный порошок желтого цвета.
Набор реагентов должен обеспечивать рост тест-штампов Vibrio cholerae cholerae 01 группы Р-1 (145), Vibrio cholerae eltor 01 группы М-878 (890), Vibrio cholerae non 01 P-9741 при посеве по 0,1 мл микробной взвеси каждого тест-штамма через 12-14 часов инкубации при температуре 37oС в виде гладких, полупрозрачных с голубоватым оттенком в проходящем свете колоний. диаметром не менее 1,0 мм.
Предназначена для выделения коклюшного микроба из инфицированного материала и культиворования штаммов.
Состав: кпанкреатический гидролизат казеина, натрия хлорид, натрий углекислый, динатрия фосфат обезвоженный, экстракт кормовых дрожжей, агар микробиологический.
Приготовление: питательную среду в количестве, указанном на этикетке, тщательно размешивают в 1 л воды дистиллированной, кипятят в течение 2-3 мин, периодически перемешивая, до полного расплавления агара. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр расливают во флаконы и стерилизуют автоклавированием в течении 20 минут при температуре 120oС.
Витаминов в точно установленных дозировках. В качестве источников азота в них используются аминокислоты. Достоинство этих сред в том, что они имеют постоянный состав, по ним можно определить потребности микробов в тех или иных питательных веществах.
Плотные питательные среды готовят из жидких с добавлением уплотнителя. В качестве уплотнителя обычно применяют агар-агар. Агар-агар - продукт, получаемый из морских водорослей, представляет собой желтоватый порошок или пластинки, содержит высокомолекулярные полисахариды , не расщепляется большинством микроорганизмов, не разрушается при автоклавировании, питательную ценность сред не изменяет, не подавляет рост микробов. Для иммунологических и бактериологических полей используется вымороженный, осветленный агар, который при кипячении или автоклавировании смеси порошка с водой расплавляется при температуре 85-100°С, а при охлаждении до 45-48°С образует гель.
Для приготовления, плотных питательных сред агар-агар добавляют в концентрации от 1,5 до 3%.
Простые среды.
Мясо-пептонный бульон (МПБ) является белковой основой всех сред.
Существует несколько способов приготовления МПБ:
а) на мясной воде с добавлением готового пептона - это так называемый мясо-пептонный бульон;
б) на переварах продуктов гидролиза исходного сырья при помощи ферментов (трипсина - бульон Хоттингера, пепсина - бульон Мартена).
Они удобны при транспортировке, могут длительно храниться, избавляют лаборатории от громадного процесса приготовления сред, приближают к разрешению вопроса о стандартизации сред. Медицинская промышлен-ность производит сухие среды Эндо, Левина, Плоскирева, висмутсульфит агар, питательный агар, углеводы с индикатором ВР и другие.
Термостаты
Для культивирования микроорганизмов используют термостаты.
Термостат - это аппарат, в котором поддерживают постоянную температуру. Прибор состоит из нагревателя, камеры, двойных стенок, между которыми циркулирует воздух или вода. Температура регулируется тер-морегулятором. Оптимальная температура для размножения большинства микроорганизмов 37°С.
Методика приготовления пластинчатого агара
МПА расплавляют на водяной бане, затем остужают до 50-55°С. Горлышко флакона обжигают в пламени спиртовки, открывают чашки Петри так, чтобы вошло горлышко флаконы, не прикасаясь к краям чашки, выливают 10-15 мл МПА, закрыв крышку, покачивают чашку, чтобы среда равномерно распределилась, оставляют на горизонтальной поверхности до застывания. После подсушивания чашки с пластинчатым агаром хранят на холоде.
Посев петлей
Стерильной остуженной петлей берут каплю материала, левой рукой приоткрывают один край чашки, вносят петлю внутрь и у противоположного края делают петлей несколько штрихов на одном месте, затем петлю отрывают и засевают материал параллельными штрихами от одного края чашки к другому с интервалом 5-6 мм. В начале посева, когда микробов на петле будет много, они дадут сливной рост, но с каждым штрихом микробов на петле остается все меньше, и они будут оставаться одиночными и давать изолированные колонии.
Посев по методу Дригальского
Этот метод используется при посеве материала, обильно обсемененного микрофлорой (гной, испражнения, мокрота). Для посева по методу Дригальского берут шпатель и несколько чашек (3-4). Шпатель - это инструмент, изготовленный из металлической проволоки или стеклянного дрота, загнутого в виде треугольника или Г-образно. Материал петлей или пипеткой вносят в первую чашку и равномерно распределяют шпателем по поверхности среды, этим же шпателем, не прожигая его, втирают материал в питательную среду во второй чашке, а затем - в третьей. При таком посеве в первой чашке будет сливной рост, а в последующих чашках вырастают изолированные колонии.
Выделение чистой культуры по Щукевичу
Для посева берут свежеприготовленную питательную среду с конденсатом. Исследуемый материал забирают петлей и вносят его осторожно, соблюдая правила асептики, не касаясь среды и стенок, в конденсационную воду. Бактерии с высокой подвижностью «выползают» на влажную поверхность скошенного агара.
В результате самостоятельной работы студент должен знать:
1. Классификацию, морфологию грибов, их методы изучения.
2. Классификацию и морфологию актиномицетов.
3. Правила противоэпидемических режимов и техники безопасности.
Уметь:
1. Дифференцировать микроорганизмы при микроскопии.
2. Микроскопировать окрашенные препараты.
3. Обеззараживать материал, обрабатывать руки дезинфирующими препаратами.
4. Приготавливать препараты из чистых культур.
Кровяной агар для постановки САМР-теста . К 2% питательному агару, рН 7,4-7,6, добавляют 0,2% глюкозы и эритроциты барана или крупного рогатого скота. Эритроциты из цитратной крови трижды промывают изотоническим раствором хлорида натрия с целью удаления антигемолизина, который может содержаться в сыворотке, затем ресуспендируют их в том же растворе до первоначального объема крови. К агару добавляют 5% взвеси эритроцитов.
Желчно - щелочной агар (далее-ЖЩА). Сухой питательный агар - 35,0 г; дрожжевой автолизат - 20,0 мл; глюкоза - 10,0 г; дистиллированная вода - 600 мл. Агар расплавляют, профильтровывают, добавляют свежей бычьей желчи - 400,0 мл и карбонат натрия - 5,0 г.
Стерилизуют готовую среду автоклавированием при 112 0 С в течение 15 минут. Перед разливкой в чашки к среде прибавляют 50,0 мл свежей крови (барана, кролика или человека), 12,5 мл 0,01% раствора кристаллического фиолетового и 20 мл раствора гидроксида калия (далее-КОН).
Молоко с метиленовым синим. Свежее молоко доводят до кипения, оставляют на сутки, освобождают от сливок, вторично кипятят, снова оставляют на сутки и вторично снимают верхний слой. Обезжиренное таким образом молоко фильтруют через толстый слой ваты, подщелачивают 10% раствором карбоната натрия до рН 7,2. К 100 мл молока прибавляют 2,0 мл 1% водного раствора метиленового синего. Приготовленную таким образом среду разливают по 5,0 мл в стерильные пробирки, стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 минут.
Энтерококковая дифференциально - диагностическая среда (ЭДДС). Сухой питательный агар - 35 г, автолизат дрожжевой для приготовления питательных сред - 20 мл, глюкоза - 10 г, дистиллированная вода - 800 мл. Расплавляют при нагревании, профильтровывают, стерилизуют при 112 0 С в автоклаве 15 минут, рН 7,2-7,4.
Перед разливкой в чашки в питательную среду добавляют ТТХ - 0,1 г; водного раствора кристаллического фиолетового 0,01% - 12,5 мл; налидиксовой кислоты - 0,1 г; стерильного обезжиренного молока, подогретого до 44-45 0 С - 200 мл; свежей дефибринированной крови (животных или человека) - 50 мл. Содержимое тщательно размешивают и разливают по чашкам по 7 мл.
Сахарно - дрожжевой питательный агар с теллуритом калия. Сухой питательный агар - 35 г, дрожжевой автолизат - 20 мл, глюкоза - 10 г, дистиллированная вода - 1000 мл. Приготовленную смесь расплавляют при нагревании, добавляют лимоннокислого натрия - 5,0 г. Стерилизуют среду при 112 0 . С в течение 15 минут, рН 7,2-7,4. Перед разливкой среды в стерильные чашки добавляют 50 мл лошадиной сыворотки, 0,1 г налидиксовой кислоты и 0,7 г (35 мл 2% водного раствора) теллурита калия, тщательно размешивают.
Питательный бульон с глюкозой. К 100 мл питательного бульона, рН 7,2-7,4, прибавляют 0,2 г глюкозы.
Приготовленную среду стерилизуют дробно 3 дня подряд по 20 минут или однократно 15 минут при 0,5 атм. в автоклаве.
5% кровяной агар. К 100 мл 2% питательного агара, расплавленного и остуженного до 45 град. С, рН 7,4-7,6, соблюдая правила асептики, добавляют 5 мл дефибринированной бараньей, лошадиной или кроличьей крови. Смесь тщательно перемешивают, разливают в чашки слоем 3-4 мм.
Похожая информация:
- III. Факторы микросреды туриндустрии Воронежской области
- Административно-правовое регулирование охраны окружающей среды. Административно-правовой статус природоохранных органов
